Warum ist es notwendig, einen In-vivo-Nachweis exogener Viren durchzuführen?
Im System der Virussicherheitsbewertung für biologische Produkte ist die In-vivo-Inokulation von Tieren eine seit langem etablierte und ausgereifte un{1}}spezifische Nachweismethode. Dabei wird die Testprobe in empfindliche Labortiere oder Hühnerembryonen geimpft und dabei das intakte Lebenssystem und die Immunantwort des Tieres genutzt, um eine mögliche infektiöse Viruskontamination aufzudecken. Während Next-Generation Sequencing (NGS) und andere molekulare Methoden von einigen Vorschriften als moderne Alternativen mit technologischen Fortschritten akzeptiert wurden, nimmt die klassische In-vivo-Methode aufgrund ihrer einzigartigen biologischen Nachweisprinzipien immer noch eine wichtige Position in den Arzneibüchern vieler Länder weltweit ein und bleibt eine der Eckpfeilermethoden für die Bewertung der Virussicherheit.
Kerntechnologie: In-vivo-Inokulationsmethode für Tiere und Hühnerembryonen
Die In-vivo-Inokulation bei Tieren und Hühnerembryonen ist eine In-vivo-Nachweistechnik, die ein Lebendwirtssystem für das Breitband-Virus-Screening nutzt. Sein Grundprinzip ist wie folgt: Die zu testende Probe wird über mehrere Wege (intrazerebral, peritoneal, Dottersack, Allantoishöhle usw.) in einen empfänglichen tierischen Wirt (Welpe, erwachsene Ratte, Meerschweinchen, Kaninchen oder Hühnerembryo) inokuliert. Wenn in der Probe ein infektiöses Virus vorhanden ist, kann es sich im Wirt vermehren und direkte pathogene Wirkungen hervorrufen (charakteristische klinische Symptome, histopathologische Schäden oder Tod). Durch genaue Überwachung und Aufzeichnung der Überlebensraten der Tiere kann das Vorhandensein infektiöser Lebendviren in der Probe indirekt nachgewiesen werden. Diese Methode kann Viren erkennen, die sich in In-vitro-Zellkulturen nur schwer vermehren oder keine typischen Läsionen hervorrufen (wie bestimmte Enteroviren und Arboviren) und dient somit als wichtige regulatorische Ergänzung zu In-vitro-Virus-Screeningsystemen.
Im aktuellen globalen Regulierungssystem für biologische Produkte hat sich die Anwendungslogik der In-vivo-Inokulation tiefgreifend verändert, und ihre Kernanforderungen lassen sich wie folgt zusammenfassen:
Die Veröffentlichung des Chinesischen Arzneibuchs (Ausgabe 2025) markiert einen entscheidenden Wandel: Die Tierimpfungsmethode hat sich von „obligatorischen Tests“ zu einer „risikobasierten Strategie“ entwickelt. Die Vorschriften betonen die Notwendigkeit einer Risikobewertung in Verbindung mit Zell- und Prozessüberlegungen und eröffnen alternative Wege wie validierte Methoden wie NGS. Sie stellen außerdem strengere Anforderungen an wichtige Parameter (z. B. den 28-tägigen Beobachtungszeitraum), um eine präzise und effiziente Virensicherheitskontrolle zu erreichen.
Sobald die Methode festgelegt ist, muss besonderes Augenmerk auf die Unterschiede in den Betriebsdetails verschiedener Regulierungssysteme gelegt werden. Große globale Arzneibücher (wie ChP, USP, EP) haben spezifische Vorschriften zu wichtigen technischen Parametern wie Tieralter, Gewicht, Anzahl, Verabreichungsweg und Beobachtungszeitraum. Das Protokolldesign muss sich strikt an die neuesten für den Zielmarkt geltenden Vorschriften halten, um eine präzise Compliance-Anpassung zu erreichen.
Referenzinformationen: Die aufgeführten Zielviruslinien sind Auszüge aus Tabelle 5 (In-vivo-Virus-Screeningtest) der USP-NF General Rules<1237>„Methoden zur Virenerkennung“.
Kerntechnologien: Antikörperproduktionstests (MAP, RAP und HAP)
Antikörperproduktionstests (MAP/RAP/HAP) sind in vivo spezifische Screening-Methoden für bekannte Viroginseng-Gruppen einer bestimmten Spezies. Das Grundprinzip ist wie folgt: Die zu testende Probe wird in ein anfälliges Wirtstier geimpft, das spezifisch pathogen-frei (SPF) ist. Wenn die Probe aktive Viren oder virale Antigene enthält, wird im Wirt eine spezifische humorale Immunantwort ausgelöst. Nach einem vorgeschriebenen Beobachtungszeitraum (in der Regel 28 Tage oder länger) wird das Vorhandensein spezifischer Antikörper gegen das Zielvirus im Serum des Tieres nachgewiesen. Der Nachweis von Serumantikörpern ist ein direkter Beweis für das Vorhandensein infektiöser Viren oder immunogener Viruskomponenten in der Probe.
Referenz: Die in der folgenden Tabelle aufgeführten Viruslinien sind aus der ICH-Q5A(R2)-Richtlinie (Tabelle 3) abgeleitet und decken die wichtigsten Zielviren ab, auf die die Richtlinie ein Screening erfordert
Unser Unternehmen bietet Ihnen professionelle Dienstleistungen
Unser Testsystem hält sich strikt an die gängigen internationalen Standards wie das Chinesische Arzneibuch, USP, EP und ICH. Wir verfügen über ausgereifte Compliance-Lösungen und erfolgreiche Fälle, um die gleichzeitige Registrierung und Beantragung in mehreren Regionen, darunter China, den USA und Europa, zu unterstützen und so den Weg für die effiziente Globalisierung Ihrer Produkte zu ebnen.
Wir bieten professionelle Risikobewertung und Strategieplanung. Basierend auf den neuesten Vorschriften analysieren wir systematisch Ihre Zellgeschichte und Herstellungsprozesse, demonstrieren wissenschaftlich den optimalen Nachweisweg und passen ihn an (traditionelle In-vivo-Methode/NGS/Kombinationsvalidierung), um Ihnen dabei zu helfen, die beste Balance zwischen Compliance-Zuverlässigkeit und F&E-Effizienz zu erreichen.
Wir betreiben sowohl ausgereifte, klassische In-vivo-Testplattformen als auch bewährte moderne Plattformen wie NGS. Wir können Teststrategien entwickeln, die auf das Stadium und die Risikomerkmale des Produkts zugeschnitten sind, wie z. B. die Verwendung von NGS für ein effizientes Erstscreening mit anschließender In-vivo-Bestätigung, und bieten Ihnen so flexible und zuverlässige duale technische Unterstützung.
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