Retrovirus-Tests

Erkennungsmethoden

Methodenprinzipien

Regulierungsschwerpunkt

Kokultivierungstest

Diese Methode nutzt empfindliche Indikatorzellen, um infektiöse Viruspartikel einzufangen und bestimmt den Kontaminationsstatus durch Beobachtung von Phänomenen wie zytopathischen Effekten, Herdbildung oder spezifischer Antigenexpression. Es kann das Vorhandensein infektiöser retroviraler Partikel nachweisen.

• Obligatorische Testziele: EOPC-Zellen oder Zellen mit begrenzter Passage.

• Kerntestverfahren: Es muss ein zwei{0}}stufiges Co--Kultursystem (Virusamplifikationsphase und Aktivitätsindikatorphase) verwendet werden.

• Anforderungen an empfindliche Zellen: Abhängig von der Art und Herkunft der getesteten Zellen müssen für retrovirale Infektiositätstests unterschiedliche oder mehrere empfindliche Zelllinien verwendet werden.

• Anforderungen an die Kulturpassage: Das Co{0}}-Kultursystem muss mindestens fünfmal (in der Regel öfter) passagiert werden, um eine ausreichende Amplifikation des potenziellen Virus sicherzustellen.

Transmissionselektronenmikroskopie

Diese Methode nutzt hochauflösende Transmissionselektronenmikroskopie, um die Morphologie und Struktur viraler Partikel (wie die typische ikosaedrische Hüllenstruktur und die Nukleokapsidmorphologie) direkt zu beobachten und so eine visuelle Identifizierung und quantitative Analyse zu ermöglichen. Es kann bekannte und unbekannte Viruspartikel erkennen, einschließlich nicht-replizierender Partikel oder solcher, die nicht durch Infektiositätstests erfasst werden.

• Obligatorische Testziele: EOPC-Zellen oder Zellen mit begrenzter Passage.

• Kernanforderung: Art und Menge der retroviralen Partikel müssen identifiziert werden.

• Probenanforderungen: Es sind ultradünne Schnitte erforderlich, die in der Regel eine systematische Beobachtung von mindestens 200 Zellen erfordern.

• Besondere Bestimmungen (Chinesisches Arzneibuch 2025): Für bestimmte Nagetierzellen (z. B. CHO, BHK-21) oder Insektenzellen sollte auch die Menge der Viruspartikel in der Ernteflüssigkeit und deren Infektiosität bestimmt werden.

Reverse-Transkriptase-Assay

Basierend auf der Eigenschaft der Reversen Transkriptase, die die Synthese von DNA aus einer RNA-Matrize katalysiert, kann das Vorhandensein von Retroviren indirekt durch den Nachweis der radioaktiven oder fluoreszierenden Signale der Reaktionsprodukte bestimmt werden, um die Enzymaktivität zu quantifizieren. Diese Methode ist unabhängig von der Virusinfektiosität und kann umfassend nach Viruspartikeln mit enzymatischer Aktivität suchen.

• Erläuterung der Ausnahme: Sowohl ICH Q5A(R2) als auch das Chinesische Arzneibuch (Ausgabe 2025) besagen eindeutig, dass dieser Test für Zellen, von denen bekannt ist, dass sie Retroviren produzieren (wie bestimmte Nagetier-, Insekten- und Vogelzellen), nicht erforderlich ist.

• Alternative Anforderungen: Im Ausnahmefall muss eine umfassendere Prüfung auf Art, Menge und Infektiosität der Viruspartikel durchgeführt werden.

PCR oder andere spezifische In-vitro-Methoden

Wenn die Ergebnisse der Reverse-Transkriptase-Aktivität unklar sind oder nicht gemessen werden können, können basierend auf der Speziesspezifität von Zellen speziesspezifische Retrovirus-Nachweismethoden wie Retrovirus-PCR, Immunfluoreszenz, ELISA usw. verwendet werden. Die quantitative PCR von Retroviren kann auch zur Quantifizierung von Retroviruspartikeln verwendet werden.

• Primäre Positionierung: Wird typischerweise als wichtige Ergänzung zu den oben genannten Kernmethoden und als Werkzeug zur Bestätigung der Spezifität verwendet.

• Anwendungsszenarien: Wird häufig für den hochempfindlichen Nachweis und die Quantifizierung spezifischer bekannter Viren (z. B. qPCR) oder zur Bereitstellung von Beweisen auf molekularer-Ebene verwendet, wenn die Ergebnisse der Infektiosität/Elektronenmikroskopie fraglich sind.

• Regulatorische Grundlage: Seine Anwendung erfordert eine gründliche Validierung und muss den relevanten Richtlinien für die Validierung spezifischer Nachweismethoden im Zielmarkt entsprechen (z. B. dem Chinesischen Arzneibuch (Ausgabe 2025)).

Professionelle Dienstleistungen

Umfassender Schutz für Sie

Globaler Compliance-Ansatz

Unsere Testmethoden sind tief in die Kernanforderungen von ICH Q5A(R2), dem Chinesischen Arzneibuch (2025), USP und EP integriert und bieten einen One-Stop-Service, der Infektiositätstests, Transmissionselektronenmikroskopie (TEM) und Reverse-Transkriptase-Aktivitätserkennung abdeckt und die gleichzeitige Anwendung in mehreren Regionen, darunter China, den USA und Europa, effizient unterstützt.

Breite-Erkennungsfähigkeit

Wir verfügen über eine Vielzahl empfindlicher Zelllinien und ausgereifter Methoden für verschiedene Risikoszenarien, mit denen Zielpathogene, einschließlich muriner Retroviren, Tropismus-Retroviren und Insekten-Retroviren, effektiv nachgewiesen werden können, wodurch ein breites Spektrum und eine hohe Spezifität des Nachweises gewährleistet werden.

Eigene Elektronenmikroskopie-Plattform

Wir verfügen über ein eigenes hochauflösendes Transmissionselektronenmikroskop und ein erfahrenes, professionelles technisches Team, um eine geschlossene{1}Qualitätskontrolle während des gesamten Prozesses von der Probenvorbereitung bis zur Datenausgabe zu gewährleisten. Wir können auch schnelle quantitative Dienstleistungen für Rohstoffe (UPB) anbieten, um die nachgelagerte Überprüfung der Virusbeseitigung genau zu unterstützen.

Umfassende Methodenvalidierung

Alle Methoden werden gemäß GMP/GLP-Standards durchgeführt und halten sich strikt an das Chinesische Arzneibuch (Ausgabe 2025) und ICH Q2(R2) für eine umfassende Validierung von Spezifität, Nachweisgrenzen usw. Wir bieten ein vollständiges Projektmanagement vom Protokolldesign bis zur Anwendungsunterstützung und stellen so die Datenkonformität und -zuverlässigkeit sicher.

Schutz der Datenintegrität

Vom Probeneingang über die Versuchsdurchführung bis hin zur Berichterstellung haben wir ein vollständiges Qualitätssystem eingerichtet, das den GMP- und ALCOA+-Grundsätzen entspricht. Durch eine professionelle mehrstufige Datenüberprüfung und einen robusten Mechanismus zur Abweichungskontrolle (CAPA) stellen wir grundsätzlich eine hohe Qualität und überprüfbare Lieferung für jedes Projekt sicher.